为避免提取的核酸在柜内反复循环,造成标本之间的交叉污染,出现假阳性结果,该区域配备的生物安全柜必须是B2型的。生物安全柜工作区垂直气流全部来自实验室,排风经过过滤器(www.rfilter.com)过滤后直接排至室外,不允许回到安全柜和实验室中。
根据经验,如果实验室内配备生物安全柜,每配备一台,实验室的面积增加10m2;标本制备区的面积宜在25m2~30m2之间。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
扩增室该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。
在巢式PCR测定中,通常在轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样必须在本区内进行。
扩增室主要配备PCR实验室的核心仪器PCR仪,本文实例中使用了ABI7500和ABI9700两种PCR仪。
在实验室建造过程中,需要给PCR仪配备专门的UPS电源,以保证其正常工作。该区面积控制在15m2~20m2。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。建议采用5~10Pa压差,在控制上比较容易实现。
药品仪器室:防火、防潮等设施、有单独的危险品存放处,有防护设备和急救箱,室内设有通风换气装置,在仪器的上方一般要求有万向抽气罩或者原子吸收罩,在使用仪器进行实验操作时,可将废气排放到室外,面药品柜的顶部可装有排气系统。
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固体废弃物的处理:废物用双层废物包装袋盛装,采用鹅颈结式封口,分层封扎,标识清楚,标注“新冠”。样本检测过程中的枪头、离心管、废液等与样本接触的耗材放入盛有5500~10000 mg/L 含氯消毒剂的黄色利器盒中浸泡30min以上,盖紧利器盒,按废物处置方法处置。实验室的性废物不允许堆积存放,应当及时采用压力蒸汽灭菌处理。灭菌后,加套一层废物袋,由专人收集,密闭转运。对清空的场地用1000mg/L 的有效氯消毒液进行喷洒消毒。